Im folgenden Versuch wurden die Oligosaccharidketten A und B des Glykoproteins Thyroglobulins vom Rind durch Proteolyse mit Pronase E isoliert. Der Verdau des Proteinanteils wurde mittels Ninhydrintest und SDS-PAGE verfolgt. Die Zuckerketten wurden durch Größenausschlusschromatographie (engl. Size exclusion chromatography, SEC) mithilfe einer FPLC-ÄKTAprime-Säule von den freien Aminosäuren und Peptiden abgetrennt. Anschließend wurden die Oligosaccharidketten A und B mittels Ionenaustauschchromatographie (engl. Ion exchange chromatography, IEC) voneinander getrennt. Abschließend wurden die quantitativen Zusammensetzung der Ketten mittels Neutralzuckertest und Sialinsäuretest analysiert.
Inhaltsverzeichnis
Abstract
1 Einleitung
2 Material und Methoden
2.1 Material
2.1.1 Enzymatische Proteolyse von Thyroglobulin
2.1.2 Diskontinuierliche SDS-PAGE nach Laemmi
2.1.3 Ninhydrintest
2.1.4 Größenausschlusschromatographie
2.1.5 Ionenaustauschchromatographie
2.1.6 Neutralzuckernachweis
2.1.7 Sialinsäurenachweis
2.2 Methoden
2.2.1 SDS-PAGE
2.2.2 Ninhydrintest
2.2.3 Größenausschlusschromatographie mittels FPLC-ÄKTAprime
2.2.4 DEAE-Anionenaustauschchromatographie
3 Ergebnisse
3.1 Proteolyse
3.2 Proteinbestimmung nach Bradford
3.3 SDS-PAGE
3.4 Enzymaktivitätstest
3.5 Reinigungstabelle
4 Diskussion
4.1 Kationenaustauschchromatographie
4.2 Proteinbestimmung nach Bradford
4.3 SDS-PAGE
4.4 Enzymaktivität
4.4.1 Zusammenfassung
Anhang
5.1 Beispielrechnungen
5.2 Rohdaten
5.2.1 Proteinbestimmung nach Bradford
5.2.2 Enzymaktivitätstest
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