Untersuchungen zur Organisation und Sequenz menschlicher Histongene

Doctoral Thesis / Dissertation , 1989 , 182 Pages , Grade: magna cum laude

Medicine - Neoplasms, Oncology

DNA-Sequenzierungen nach Sanger und Maxam-Gilbert -
Histone spielen eine wichtige Rolle in der Organisation der Erbsubstanz und sind an Prozessen der Genregulation beteiligt.
Ziel der Arbeit war es, Gene menschlicher Histone zu analysieren und deren Anordnung (Histongengruppen, Cluster) auf dem menschlichen Genom zu beschreiben und mit anderen Säugern zu vergleichen. Es gelang die Analyse der Organisation von 3 Clustern menschlicher Histongene und Bestimmung deren DNA Sequenzen.

Inhaltsverzeichnis

• 1. Einleitung
• 2. Material und Methoden
• 2.1. Material
• 2.1.1. Chemikalien
• 2.1.2. Reagenziensätze
• 2.1.3. Enzyme
• 2.1.4. Nucleotide
• 2.1.5. Zellen
• 2.2. Methoden
• 2.2.1. Analyse einer menschlichen Genbibliothek
• 2.2.1.1. Aufbau und Herkunft
• 2.2.1.2. Reagenzien
• 2.2.1.3. Herstellung von Agarplatten
• 2.2.1.4. Aussaat von Bakteriophagen
• 2.2.1.5. Transfer von Phagen-DNA auf Nitrocellulose
• 2.2.1.6. Hybridisierungssonden
• 2.2.1.7. Hybridisierung von membrangebundener DNA
• 2.2.1.8. Autoradiographie
• 2.2.1.9. Anlegen von Bakteriophagenstammkulturen
• 2.2.2. Präparation von Bakteriophagen-DNA
• 2.2.2.1. Reagenzien
• 2.2.2.2. Präparation aus Plattenlysaten
• 2.2.2.3. Präparation aus Flüssigkulturen
• 2.2.2.4. Präparation in kleinem Maßstab
• 2.2.2.5. Aufreinigung von Phagenlysat mit Lambdasorb-Antikörpern (Promega)
• 2.2.2.6. Aufreinigung von Phagenlysat mit DEAE-Cellulose
• 2.2.3. Verdauung von DNA mit Restriktionsenzymen
• 2.2.3.1. Reagenzien
• 2.2.3.2. Durchführung
• 2.2.4. Agarose-Gelelektrophorese von DNA
• 2.2.4.1. Reagenzien
• 2.2.4.2. Durchführung
• 2.2.5. Dot-Blot-Analyse von DNA
• 2.2.5.1. Reagenzien
• 2.2.5.2. Durchführung
• 2.2.6. Übertragung von DNA auf Membranfilter
• 2.2.6.1. Kapillarblot nach Southern
• 2.2.6.2. Diffusionsblot nach Reed und Mann
• 2.2.7. Markierung von DNA
• 2.2.7.1. Radioaktive Markierungstechniken
• 2.2.7.2. Nichtradioaktive Markierungen
• 2.2.8. Isolierung von DNA-Fragmenten aus Gelen
• 2.2.8.1. Extraktion aus Low-Melting-Point (LMP)-Agarosegel
• 2.2.8.2. Isolierung aus TypII-Agarosegel
• 2.2.9. Subklonierung von DNA-Fragmenten
• 2.2.9.1. Verwendete Vektoren
• 2.2.9.2. Dephosphorylierung von Vektoren
• 2.2.9.3. Vorbereitung der DNA-Fragmente
• 2.2.9.4. Ligation

Zielsetzung und Themenschwerpunkte

Die Dissertation untersucht die Organisation und Sequenz menschlicher Histongene. Ziel ist es, detaillierte Einblicke in die molekularen Mechanismen der Genstruktur und -funktion zu gewinnen.

• Analyse menschlicher Histongene
• Untersuchung der Genorganisation
• Sequenzierung von DNA-Fragmenten
• Anwendung verschiedener molekularbiologischer Methoden
• Detaillierte Beschreibung der verwendeten Methoden

Zusammenfassung der Kapitel

Kapitel 1 (Einleitung) führt in das Thema der menschlichen Histongene ein und beschreibt den aktuellen Forschungsstand. Kapitel 2 (Material und Methoden) detailliert die verwendeten Materialien, Chemikalien, Reagenzien und die angewandten Methoden, einschließlich der Analyse einer menschlichen Genbibliothek, der Präparation von Bakteriophagen-DNA, der Verdauung von DNA mit Restriktionsenzymen, der Agarose-Gelelektrophorese und der Subklonierung von DNA-Fragmenten.

Schlüsselwörter

Histongene, Genorganisation, DNA-Sequenzierung, Molekularbiologie, Genbibliothek, Restriktionsenzyme, Klonierung, Agarose-Gelelektrophorese.

Häufig gestellte Fragen

Was sind Histone und welche Funktion haben sie?

Histone sind Proteine, die eine zentrale Rolle bei der Verpackung der DNA im Zellkern spielen und an der Regulation der Genaktivität beteiligt sind.

Welche Methoden wurden zur DNA-Sequenzierung genutzt?

In der Arbeit kamen die klassischen Sequenzierungsmethoden nach Sanger sowie nach Maxam-Gilbert zum Einsatz.

Was war das Ziel der Untersuchung der Histongene?

Ziel war es, die Anordnung der menschlichen Histongene in Clustern auf dem Genom zu beschreiben und diese mit anderen Säugetieren zu vergleichen.

Wie viele Cluster menschlicher Histongene wurden analysiert?

Der Arbeit gelang die detaillierte Analyse der Organisation von drei Clustern menschlicher Histongene.

Was ist eine Genbibliothek?

Eine Genbibliothek ist eine Sammlung von DNA-Fragmenten eines Organismus, die in Vektoren (wie Bakteriophagen) geklont wurden, um spezifische Gene untersuchen zu können.

Welche Rolle spielen Restriktionsenzyme in der Arbeit?

Restriktionsenzyme werden verwendet, um die DNA an spezifischen Stellen zu schneiden, was die Analyse und Subklonierung einzelner Genfragmente ermöglicht.

• College: University of Marburg
• Grade: magna cum laude
• Author: Dr. Stefan Eick (Author)
• Publication Year: 1989
• Pages: 182
• Catalog Number: V120678
• ISBN (eBook): 9783640291847
• Language: German
• Tags: Untersuchungen, Organisation, Sequenz, Histongene, human, Molekularbiologie